|
李傳平，溫錦江，張金輝，陶勝來
解放軍第532醫(yī)院感染科
實(shí)驗(yàn)背景
我科在丙型肝炎診治過程中，發(fā)現(xiàn)了PCR-HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果與臨床療效不符，而與血樣采集后放置時(shí)間的長(zhǎng)短有關(guān)。為驗(yàn)證血樣放置時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，從2003年4月～2005年6月對(duì)在本科診治的93例丙型肝炎血清，分別在采集1h、2h、3h、4h、8h、72h進(jìn)行RNA檢測(cè)，觀察檢測(cè)時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響程度。
➤實(shí)驗(yàn)目的
觀察自抽取血樣至PCR檢測(cè)HCV-RNA含量，在不同時(shí)間對(duì)檢出率的影響。
➤ 材料與方法
實(shí)驗(yàn)材料：標(biāo)本來自2003年4月～2005年6月在我科診治的93例丙型肝炎血清（診斷符合2000年西安會(huì)議修訂的肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)）［1］，病毒含量＞8.0×103copies/ml（參考值＜8.0×103copiesml）。
儀器和試劑：日本大和FQD-33A熒光定量PCR儀，由中山大學(xué)達(dá)安基因診斷中心提供。
實(shí)驗(yàn)方法：（1）負(fù)壓抽取靜脈血，放3℃～4℃貯存。（2）RNA提取和擴(kuò)增按試劑說明書和儀器規(guī)程執(zhí)行。
實(shí)驗(yàn)步驟：93例丙型肝炎血標(biāo)本，在采集后，放置3℃～4℃貯存，分6個(gè)時(shí)間段，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量基因廣增儀檢測(cè)HCV-RNA含量。結(jié)果 1h內(nèi)98.92%，2h內(nèi)97.85%，3h內(nèi)71.6%，4h內(nèi)70.89%，8h內(nèi)69.66%，72h以上69.44%。
➤ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
標(biāo)本采集至檢測(cè)，1h內(nèi)98.92%（92/93），2h內(nèi)97.85%（91/93），3h內(nèi)71.6%（58/81），4h內(nèi)70.89%（56/79），8h內(nèi)69.66%（62/89），72h以上69.44%（50/72）。上述結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析證實(shí)檢測(cè)陽(yáng)性率2h內(nèi)與2h以上差異有顯著性P＜0.01，3h以上各時(shí)間段檢測(cè)陽(yáng)性率差異無顯著性，P＞0.05。
➤實(shí)驗(yàn)討論
丙型肝炎病毒（HCV）的持續(xù)感染，長(zhǎng)期的慢性肝細(xì)胞壞死、再生，易形成肝硬化，可促進(jìn)肝細(xì)胞癌變［2］。及早地發(fā)現(xiàn)和有效的診治是減少肝硬化和肝癌的有力措施。丙型肝炎病毒RNA是反映HCV感染、復(fù)制的最直接、可靠的指標(biāo)，在確診丙型肝炎和篩選獻(xiàn)血員；在評(píng)價(jià)治療丙型肝炎藥物療效與預(yù)后判斷方面，HCV-RNA的檢測(cè)具有至關(guān)重要的作用。但HCV-RNA十分脆弱，易被降解，PCR-HCV-RNA檢測(cè)靈敏度高，易造成假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果［3］，給臨床工作造成誤導(dǎo)。本文研究表明，標(biāo)本能否正確反映機(jī)體真實(shí)情況，除完善的實(shí)驗(yàn)室條件外，與標(biāo)本的待檢時(shí)間有密切關(guān)系。標(biāo)本在采集2h內(nèi)檢測(cè)陽(yáng)性率最高，與2h以上差異有顯著性，P＜0.01。我國(guó)是一個(gè)欠發(fā)達(dá)國(guó)家，丙肝病毒感染率較高，又多無癥狀，準(zhǔn)確了解機(jī)體真實(shí)情況，能為臨床診斷、預(yù)防、治療提供可靠依據(jù)。丙型肝炎病毒RNA的檢測(cè)應(yīng)現(xiàn)采現(xiàn)做，應(yīng)以抽血到RNA檢測(cè)不超過2h為佳。
➤實(shí)驗(yàn)結(jié)論
血樣放置時(shí)間長(zhǎng)短，對(duì)HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果有明顯影響。
【參考文獻(xiàn)】
1 病毒性肝炎防治方案.中華傳染病雜志，2001，19：56-62.
2 蔣道榮，姚登福.急性丙型肝炎患者病毒株部分基因克隆及其序列分析.中華肝病雜志，2000，8：155.
3 王露楠，李金明.2000～2002年丙型肝炎病毒核酸逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定室間質(zhì)量評(píng)價(jià).中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2003，26：778-779.
來源：中華中西醫(yī)雜志
|
